بررسی اثر سالیسیلیک اسید بر بیان ژن رمز گردان هیپرفورین در علف چای (hypericum perforatum)

با توجه به اهمیت نقش ژن hppks1 در بیوسنتز هیپرفورین در گیاه علف چای، در این تحقیق اثر غلظت های مختلف سالیسیلیک اسید بر بیان این ژن با استفاده از روش real-time pcrمورد مطالعه قرار گرفت. بدین منظور، کالوس های حاصل از نمونه های برگی گیاهان علف چای کشت شده در شیشه تحت تیمار سه غلظت سالیسیلیک اسید قرار گرفتند و فعالیت ژن hppks1در زمان های 24، 48 و 72 ساعت بعد از تیمار با روش pcr با ارزیابی لحظه ای مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که در محیط عاری از الیسیتور میزان بیان ژن در زمان های مختلف تغییری نداشت. در نمونه های تیمار شده با 100 میکرومولار سالیسیلیک اسید، بعد از 24 و 48 ساعت میزان بیان ژن hppks1به طور آشکاری روند رو به رشدی داشت. روند مشابهی در نمونه های تیمار شده با غلظت 250 میکرومولار این الیسیتور نیز مشاهده شد. بر این اساس بیشترین میزان بیان ژن hppks1 مربوط به زمان 48 ساعت و کمترین آن مربوط به زمان 72 ساعت بود. بر اساس نتایج به دست آمده مشاهده شد که در هر سه زمان 24، 48 و 72 ساعت، با افزایش غلظت سالیسیلیک اسید بر میزان نسبی بیان ژن hppks1 افزوده می شود. همچنین، مشاهده گردید که میزان بیان این ژن 24 ساعت پس از آزمایش برای تیمارهای شاهد، 100 و 250 میکرومولار به ترتیب حدود یک، 9/1 و 7/2 برابر میزان بیان آن در نمونه های شاهد بود. روند مشابهی 48 ساعت پس از آزمایش نیز مشاهده شد به طوریکه با افزایش غظت از صفر به 250 میکرومولارسالیسیلیک اسید میزان نسبی بیان ژن حدود 3 برابر افزایش یافت. نتایج مشاهده شده در مدت زمان 72 ساعت نیز روند مشابهی با نتایج فوق نشان می دهد به طوریکه غلظت های صفر و 250 میکرو مولار سالیسیلیک اسید به ترتیب با حدود یک و 5/2 برابر شاهد دارای حداقل و حداکثر میزان بیان ژن hppks1 در شرایط آزمایش بودند. بر اساس نتایج فوق می توان نتیجه گرفت که با افزایش غلظت سالیسیلیک اسید بعد از گذشت 24 و 48 ساعت افزایش معنی داری در بیان ژن hppks1 مشاهده شد، درحالی که بعد از 72 ساعت در همه غلظت ها رو به کاهش گذاشت. بنابراین ممکن است انتظار داشته باشیم که افزایشی در محتوای هیپرفورین کالوس ها تحت تیمار سالیسیلیک اسید تنها تا حدود 48 ساعت بعد از تیمار مشاهده شود.